Антиденелерді тазалау

Алынған дақыл мен асциттік сұйықтықтың құрамында моноклоналды антиденелерден басқа да көптеген компоненттер болады. Сондықтан оларды бөліп алып, қоспалардан тазарту қажет.

Иммуноглобулин M (IgM) бөліп алу: негізгі кезеңдер

  1. 1

    Дақыл сұйықтығының 100 мл көлеміне 28 г аммоний сульфатын қосады (шамамен 45% ерітінді).

  2. 2

    Қоспаны 4°C-та 12 сағат ұстайды.

  3. 3

    20 минут бойы 10 000 айн/мин жылдамдықта центрифугалайды.

  4. 4

    Тұнбаны 45% аммоний сульфаты ерітіндісімен жуады.

  5. 5

    Тұнбаны 10 мл 0,05 М Tris буферінде ерітеді (қалпына келтіреді).

  6. 6

    Ерітіндіні сефарозасы бар хроматографиялық колонкадан өткізеді.

  7. 7

    Колонканы 0,05 М Tris буферімен, құрамында 0,1 М альфа-метилгликозид бар ерітіндімен жуады.

Қолданылуын анықтайтын қасиеттер

Моноклоналды антиденелердің кейінгі қолданылуы ең алдымен олардың титріне, аффиндігіне және ерекшелігіне байланысты.

Аффиндік — антидене мен антиген детерминантының өзара байланысу дәрежесі.

Моноклоналды антиденелердің титрі төмен болуы мүмкін, ал аффиндігі әртүрлі деңгейде кездеседі.

Тәжірибелік қолданылуы

  • Иммунохимия және аффинді хроматография үшін төмен аффинді моноклоналды антиденелер де жарамды.

  • ИФА (иммуноферменттік талдау) жүргізу үшін моноклоналды антиденелер жоғары аффинді болуы қажет.

  • Диагностикалық мақсатта көбіне моноклоналды антиденелердің бірнеше клонының кешендері қолданылады.

Таңбалау арқылы қолдану

Моноклоналды антиденелер, әдетте, таза күйінде қолданылмайды. Оларды ферменттермен немесе радиоизотоптармен таңбалап, ИФА және РИА (радиоиммундық талдау) зерттеулерінде пайдаланады.